熒光原位雜交技術(shù)原理及應(yīng)用

原位雜交(in situ hybridization,ISH）指將目標(biāo)DNA或RNA序列通過放射性或非放射性物標(biāo)記后與染色體DNA進(jìn)行雜交檢測目標(biāo)序列在染色體上的位置與分布特征的技術(shù)。熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)指用熒光標(biāo)記物代替放射性同位素標(biāo)記探針而進(jìn)行的原位雜交。本文概述熒光原位雜交技術(shù)原理、標(biāo)記物的選擇、技術(shù)要點(diǎn)、發(fā)展及應(yīng)用。

一、熒光原位雜交技術(shù)原理

熒光原位雜交技術(shù)（Fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)。其基本原理是如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補(bǔ)的，二者經(jīng)變性—退火—復(fù)性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標(biāo)記上報(bào)告分子如生物素、地高辛，可利用該報(bào)告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)，經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對(duì)待測DNA進(jìn)行定性、定量或相對(duì)定位分析。與其他雜交技術(shù)進(jìn)行綜合比較發(fā)現(xiàn)，熒光原位雜交技術(shù)（FISH）具有一些優(yōu)勢：循環(huán)周期短，穩(wěn)定性高，非常安全；分辨率高，為3～20 Mb；探針能較長時(shí)間保存；多色標(biāo)記，簡單直觀；在熒光顯微鏡下在同一切片上同時(shí)觀察幾種DNA探針的定位，直接得到其相對(duì)序列和位置，從而大大加速生物基因組和功能基因組定位的研究。