質(zhì)粒載體,質(zhì)粒載體人工改造

2024-05-24 10:46

質(zhì)粒(Plasmid)是一類天然存在于細(xì)菌和真菌細(xì)胞中能獨(dú)立于染色體DNA而自主復(fù)制的共價(jià)、閉合、環(huán)狀雙鏈DNA分子,也稱為ccDNA,其大小通常在1~600 kb內(nèi)。


載體(vector)一類能自我復(fù)制的DNA分子,其中的一段DNA被切除而不影響其復(fù)制,可用以置換或插入外源(目的) DNA而將目的DNA帶入宿主細(xì)胞。常用的載體有質(zhì)粒、噬菌體、病毒等。


質(zhì)粒載體是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上為適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室操作而進(jìn)行人工構(gòu)建的質(zhì)粒。與天然質(zhì)粒相比,質(zhì)粒載體通常帶有一個(gè)或一個(gè)以上的選擇性標(biāo)記基因(如抗生素抗性基因)和一個(gè)人工合成的含有多個(gè)限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量盡可能減少,以便于基因工程操作。


質(zhì)粒構(gòu)建是分子生物學(xué)研究中較常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。原理依賴于限制性核酸內(nèi)切酶,DNA連接酶和其他修飾酶的作用,分別對(duì)目的基因和載體DNA進(jìn)行適當(dāng)切割和修飾后,將二者連接在一起,再導(dǎo)入宿主細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)目的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)的正確表達(dá)。


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